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表達感受態細胞

表達感受態細胞

簡要描述:青旗生物提供一百余種基因型不同的表達感受態細胞,滿足您的各種分子生物學實驗需求,如:普通質粒構建、藍白斑篩選、大質粒構建、易重組質粒構建、慢病毒和腺病毒載體構建、甲基化DNA克隆、高質量質粒提取、文庫構建等。
同時我們還提供多種電擊感受態細胞,為大質粒構建、高效率轉化和文庫構建提供方便。

更新時間:2022-10-25

廠商性質:生產廠家

訪問次數:305

詳細說明:

一、表達感受態細胞的基因型:

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA


二、產品介紹:

(1)DH5α菌株是實驗室常用的感受態細胞。 缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒DNA的產量和質量;
(2)重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性;(3)lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。


三、表達感受態細胞操作方法:

1. DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。


四、注意事項:

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

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