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RNA提取試劑該如何操作呢?下面一起來看看吧

發布時間:2022-11-26 點擊量:181
  RNA提取試劑是從細胞和組織中提取總RNA的即用型試劑,可以提取細菌、植物、動物組織和細胞以及新鮮血液的總RNA。
 
  那么接下來讓我們來了解一下RNA提取試劑的操作步驟吧
 
  1.樣品處理:a.植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
 
  b.動物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
 
  c.貼壁細胞:直接在培養板中加入裂解液裂解細胞,每106細胞加1ml裂解液。用取樣器吹打混勻。
 
  d.細胞懸液:離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
 
  e.血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘,10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細胞,可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。
 
  2.將處理后的樣品在室溫放置5分鐘,使得核酸蛋白復合物分離。
 
  3.向勻漿樣品中加0.2ml氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘。
 
  4.2-8℃12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中,把水相轉移到新管中,不要吸到沉淀。
 
  5.吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。
 
  6.第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻,加入吸附柱靜置2分鐘,2-8℃12000rpm離心2min,棄廢液。
 
  7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。
 
  8.向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。
 
  9.12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
 
  10.將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA。
 
  注意事項:
 
  1、所有相關器皿耗材都應為RNase-free產品,操作過程要小心,帶口罩、手套避免環境中RNA酶污染樣品。
 
  2、RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測。
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