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ELISA加樣如何避免氣泡?

發布時間:2022-03-24 點擊量:888

通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。很多說明書、教科書上也都提到,加樣時要避免出現氣泡,這到底是什么原因呢?因為在做實驗的過程中,有時為了打干凈槍頭里面的液體,很容易產生氣泡,是不是這樣對實驗結果會后什么影響?

1、包被時有氣泡的話,將導致包被不*實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。

2、封閉時有氣泡的話,將導致大量未結合位點的存在,引起非特異性結合--本底增高,假陽性。

3、加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性。

4、加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。

5、加顯色液時有氣泡的話---顯色不*。

6、加終止液時有氣泡的話(1、不能*終止反應 2、影響酶標儀比色,OD值增高)

7、洗滌時有氣泡的話,非特異性結合物不能*洗去,做無用功。

避免方法:

1、加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。

2、封閉時一定要加滿孔。

3、洗滌時一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來最終驅除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。

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